Análisis de polimorfismos asociados con pérdida de susceptibilidad al Coartem® (Artemeter/Lumefantrina) en aislados de Plasmodium falciparum, provenientes de tres localidades endémicas para malaria en Colombia

Abstract

La aparición de la resistencia a los antimaláricos ha sido un gran problema para controlar la malaria a nivel mundial y la disminución de la susceptibilidad a las Terapias Combinadas con derivados de Artemisininas (TCA) hace necesario definir un marcador molecular que facilite monitorear la propagación de poblaciones resistentes. Los genes Pfatp6 y Pfmdr1 han sido propuestos como candidatos a marcadores moleculares. El objetivo de este trabajo fue evaluar la presencia de polimorfismos en estos dos genes y verificar si se asocian con pérdida de susceptibilidad al Coartem® en aislados Colombianos con P. falciparum. Se determinó la susceptibilidad ex vivo a Artemeter, Dihidroartemisinina y Lumenfantrina de 110 aislados empleando la metodología de Microtest Marck III modificado y se realizó el seguimiento del aclaramiento parasitario por microscopia del día uno, dos o tres y finalmente se buscaron polimorfismos en los genes Pfatp6 y Pfmdr1 que pudieran estar relacionados con pérdida de susceptibilidad al Coartem®. Se obtuvo una alta susceptibilidad ex vivo a los tres medicamentos evaluados y un aclaramiento parasitario en el día dos post tratamiento, en los aislados con disminución de la susceptibilidad se realizó la búsqueda de polimorfismos en los genes Pfatp6 o Pfmdr1, se encontraron cuatro SNPs que no han sido reportados anteriormente, una mutación puntual y una deleción en cada uno de estos genes encontradas en otros estudios y un aumento en el número de copias 1 del gen Pfmdr1 en el 33% de los aislados estudiados. Se evidenció la efectividad del tratamiento con Artemeter-Lumefantrina en Colombia, los polimorfismos en los genes estudiados aportan una información inicial que puede servir para la vigilancia del cambio en el comportamiento parasitario en estudios posteriores.

Abstract. Emergence of antimalarial drug resistance is a major concern in malaria control globally; reduced sensitivity to Artemisinin-based combination therapies (ACT) highlighted the need to define a molecular marker for monitoring the spread of the resistance. Pfatp6 and Pfmdr1 genes have been proposed as molecular marker candidates. The aim of this study was to evaluate the presence of polymorphisms and associate them with reduced susceptibility to Coartem® in Colombia P. falciparum isolates. 110 isolates was assessed using Microtest Marck III to ART, DHA and LUM and monitore parasite clearance at day one, two or three and was examined polymorphisms in Pfatp6 and Pfmdr1 genes that could be associated to reduced Coartem® susceptibility. High susceptibility to all three drugs evaluated and parasite clearance on day two post treatment were obtained, polymorphisms for Pfatp6 or Pfmdr1 genes were searched in isolates with reduced susceptibility, four SNPs not reported previously, one SNP and one deletion in each of these genes and increase in the CNP of pfmdr1 1 in 33% of the isolates were identified. The effectiveness of treatment with Artemether-lumefantrine was evident in Colombia and the polymorphisms found in the studied genes provide initial information useful for surveillance of parasitic behavior in subsequent studies.