Evaluación de métodos de cuantificación de bacteria intracelular y diseño de una metodología Fluorométrica aplicada al estudio de Mycobacterium tuberculosis H37Rv

Abstract

La tuberculosis es una enfermedad infectocontagiosa que cobra la vida de más de un millón de personas cada año alrededor del mundo; los estudios de infección celular con M. tuberculosis son indispensables en el desarrollo de medicamentos y vacunas que permitan erradicar dicha enfermedad; a veces estos se ven limitados por el lento crecimiento del patógeno en ensayos cuantitativos. El presente trabajo responde a esa limitación y presenta una revisión detallada de los métodos de cuantificación de bacteria intracelular, la importancia del uso de fluoróforos en estudios de infección y plantea las condiciones experimentales que debe tener una metodología de cuantificación fluorimétrica aplicada al estudio de M. tuberculosis, en el acercamiento experimental se hicieron ensayos de infección cuantitativos con micobacterias marcadas con Naranja de Acridina o Rodamina B encontrando éste último como promisorio para ser usado en una metodología diferencial de cuantificación fluorimétrica de micobacterias intracelulares.

Abstract. Tuberculosis is an infectious disease that causes more than one million human deaths around the world per year. Studies of cellular infection with M. tuberculosis are indispensable in the development of drugs and vaccines that help us to eradicate this disease; Infection assays are sometimes limited by the slow growth of mycobacteria in quantitative experiments. The present work responds to those limitation and presents a descriptive review of methods of intracellular bacteria quantification, importance of the use of fluorophores in infection studies and raises the experimental conditions that must have on a methodology of fluorimetric quantification applied to the study of M. tuberculosis. In an experimental approach, quantitative infection assays were performed with Mycobacteria binding to Acridine Orange or Rhodamine B, the last one was found like a promising fluorophore to be used in a differential methodology of fluorimetric quantification of intracellular mycobacteria.