Evaluación de la expresión de factores de crecimiento involucrados en la reparación de heridas mucosas en tejido conectivo mucoso Artificial / Evaluation of the expression of growth factors involved in the repair of mucosal wounds in artificial connective tissue

Abstract

Ante la pérdida de la mucosa de revestimiento de la cavidad oral debidos a: patologías (enfermedad periodontal o neoplasias), traumatismos, malformaciones congénitas (labio fisurado o paladar hendido) o procedimientos quirúrgicos reconstructivos, se han propuesto terapias de medicina regenerativa, buscando minimizar las secuelas de los tratamientos convencionales. Uno de estos tratamientos, es el injerto de sustitutos de mucosa oral, como el tejido conjuntivo artificial autólogo (TCAA), elaborados mediante ingeniería tisular. Este trabajo evaluó la secreción en el medio de cultivo por parte de TCAA, de factores de crecimiento y citoquinas que intervienen en el proceso de reparación de heridas. Se usaron dos metodologías: una para la detección de los factores presentes, y otra para la identificación y cuantificación de algunos de ellos. En la metodología de detección, se usó un sistema de microarreglos de anticuerpos para identificar factores presentes en los medios de cultivo TCAA a diferentes tiempos: 4 horas, 3 y 7 días. En el sistema de cuantificación de factores secretados por el TCAA, se utilizó la tecnología de un biosensor tipo óptico (plasmón de resonancia de superficie – SPR) para los tiempos del medio de cultivo a los 3 y 7 días. Los resultados obtenidos mostraron la secreción de factores de crecimiento y citoquinas, que regulan por acción paracrina y autocrina el proceso de cicatrización de heridas mucosas. El perfil de los factores secretados dependió del tipo de sustituto y del tiempo de incubación. La cuantificación de algunos de ellos en tiempo real fue posible gracias a la tecnología de los biosensores, novedosa en nuestro país. Nuestro grupo de investigación desarrolló tejido conectivo artificial autólogo (TCAA) que ha sido evaluado preclínicamente en un modelo lagomorfo de herida de espesor parcial. / Abstract. Faced with the loss of the mucosal lining of the oral cavity due to: diseases (periodontal disease or neoplasia), trauma, congenital malformations (cleft lip or palate) or reconstructive surgical procedures, have been proposed theapies based in regenerative medicine, seeking to minimize the sequelae of conventional treatments. One such treatment is the graft of oral mucosa substitutes such as artificial autologous tissue (AACT) developed by tissue engineering. This study evaluated the secretion into the culture medium by AACT, of growth factors and cytokines involved in the process of wound repair. Two methodologies were used: one for detecting the factors involved, and other for the identification and quantification of some of them. In detection methodology was used a microarray system of antibodies for identifying factors present in the AACT media culture at different times: 4 hours, 3 and 7 days. In the methodology for the quantification of the factors secreted by the AACT was used an optical type biosensor technology (surface plasmon resonance - SPR), for the times of the culture medium at 3 and 7 days. The results showed the secretion of growth factors and cytokines, which regulate by autocrine and paracrine action the process of mucosal wound healing. The profile of secreted factors depended on the type of substitute and incubation time. Quantification of some of them in real time was possible by biosensor technology, new in our country. Our research group developed autologous artificial connective tissue (AACT), that had been evaluated preclinically in a lagomorph model partial thickness wound