El presente trabajo tuvo por objetivo realizar la clonación y secuenciación de los genes dihidrofolatoreductasa (dhfr) y dihidropteroatosintetasa (dhps) de la cepa de referencia RH y de dos aislamientos de Toxoplasma gondii obtenidos a partir de líquido céfalo-raquídeo (LCR) de pacientes HIV positivos con toxoplasmosis cerebral. Se realizó la optimización de las técnicas de extracción del DNA parasitario y de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), la secuenciación de los productos purificados obtenidos y la clonación y la secuenciación de los clonos recombinantes obteniéndose polimorfismos en los exones 2 y 4 del gen dhps. Estos hallazgos pueden emplearse como herramienta para hacer búsqueda de polimorfismos en muestras de pacientes con diferentes manifestaciones clínicas de toxoplasmosis y establecer su posible relación con cambios en la susceptibilidad a los antifolatos / Abstract. This research aims to perform the cloning and sequencing of dihydrofolate reductase (dhfr) and dihydropteroate synthetase (dhps) genes of the RH reference strain and two isolates of Toxoplasma gondii obtained from cerebrospinal fluid (CSF) of HIV positive patients with cerebral toxoplasmosis. The aim of this work was to optimize the ADN extraction technique, the conditions for the reaction of polymerase chain (PCR), sequencing of the purified products obtained and the same cloning and sequencing of the clones obtaining recombinant polymorphisms in exons 2 and 4 dhps gene. These findings can be used as a tool to search for polymorphisms in samples from patients with different clinical manifestations of toxoplasmosis and establish their possible relationship with changes in susceptibility to antifolates.