El objetivo del estudio fue determinar la prevalencia de Leucosis Viral Bovina (LVB) en vacas lecheras y establecer si existía una relación directa con la producción de leche. Se trabajo con 194 animales de la raza Holstein y Jersey (1-5 partos), en 9 hatos ubicados en la zona central del departamento del Valle del Cauca. Las 194 muestras de sangre fueron procesadas en el laboratorio de biología molecular de la Universidad Nacional de Colombia, donde se detecto el virus mediante la técnica de PCR anidada, encontrando que el 77,83% de animales fueron positivos al VLB; dentro de los positivos 66,22% fueron portadores asintomáticos del virus y 33,77% presentaron algún tipo de signos clínicos compactibles con el curso clínico de la enfermedad determinándolos como positivos sintomáticos. La producción de leche en vacas negativas fue de 5.012 kg y en las positivas fue de 4.762 kg. Se concluye que la prevalencia del provirus afecta significativamente la producción de leche en los animales evaluados//Abstract: The aim of this study was to determine the prevalence of bovine leukemia virus (BLV) in dairy cows and establish whether there was a direct relationship with milk production. We worked with 194 animals of the races Holstein and Jersey (1-5 deliveries), in 9 herds located in the central department of Valle del Cauca. The 194 blood samples were processed in the laboratory of molecular biology at the National University of Colombia, where the virus was detected by nested PCR and found that 77.83% of animals were positive; within 66.22% positive were asymptomatic carriers of the virus and 33.77% had some type of clinical signs related with the clinical course of the disease determining them as positive symptoms. Milk production in cows was 5,012 kg negative and the positive sample was 4,762 kg. We conclude that provirus prevalence significantly affects milk production in animals evaluated