La utilización de diluyentes para la crioconservación seminal en células espermáticas de peces, deben poseer ciertos componentes que procuren, por una parte, generar una adecuada presión osmótica externa (crioprotector externo), y en segundo lugar, una sustitución parcial del agua interna (crioprotector interno), tal que facilite la deshidratación celular, inhibiendo la formación de cristales de hielo intracelularmente, debido a la presencia excesiva de agua. Esto con el fin de garantizar el mejoramiento de variables de viabilidad espermáticas siempre afectadas negativamente por el criodaño. De este modo, se evaluó el efecto de la interacción entre la concentración de glucosa (5.5%, 6% y 6.5%) como inmovilizador espermático – crioprotector externo, y la concentración de DMSO (dimetilsulfóxido) (5%, 10% y 15%) – crioprotector interno, sobre la calidad espermática y el material genético en Prochilodus magdalenae. Para ello, se determinó el porcentaje de espermatozoides con movilidad rápida (Ma), media (Mb), lenta (Mc), inmóviles (Md) y movilidad total (MT); además de los daños en membrana (d-Me), daños en ADN (d-ADN), la capacidad fertilizante (TF), tasa de eclosión (TE) y tasa de malformación larval (T-mal); siempre en semen posdescongelación comparado con semen fresco. Se obtuvo que la mayor capacidad móvil espermática posdescongelación, integridad del ADN, tasa de fertilización y eclosión, pueden obtenerse con tratamientos como DMSO al 10% o al 5%, interactuando respectivamente con 6% y 5.5% de glucosa (p0.05). Por otra parte, los daños en membrana pueden reducirse al máximo con tratamientos como DMSO al 10% interactuando con glucosa al 5.5% o al 6% (p0.05). Mientras tanto, el porcentaje de larvas malformadas puede ser reducido a valores similares al grupo control, cuando la concentración de DMSO se mantiene en 10% o 5%, siempre que interactúen con glucosa al 6% (p0.05).