El cultivo de células vegetales in vitro es una técnica utilizada para obtener sustancias de interés comercial, especialmente de tipo farmacológico, por las ventajas presentes en la manipulación de medios de cultivos y condiciones ambientales que favorecen la producción de metabolitos secundarios. Esta técnica viene implementándose en varias especies vegetales en Colombia, especialmente en los laboratorios de investigación de la ciudad de Medellín. Nerium oleander es una planta ornamental propia de áreas subtropicales, sus extractos han sido utilizados en forma casera en tratamientos contra la indigestión, la malaria, enfermedades de la piel, enfermedades venéreas, enfermedades neuronales, entre otros. A nivel clínico es reconocida por los efectos cardiotónicos y antitumorales de sus metabolitos secundarios. En el presente trabajo se estudió el establecimiento de cultivos de callos y suspensiones celulares de Nerium oleander a escala de matraz agitado, y la eventual producción de peruvósido y betulina, a partir de explantes de hojas de arbustos nativos de la ciudad de Medellín, así como el efecto elicitor que pudiera tener el metil jasmonato (MeJ) sobre la producción de dichos metabolitos secundarios. Durante el establecimiento del cultivo de callos de N. oleander, utilizando como medio basal de crecimiento MS (Murashige y Skoog, 1962), se determinaron las mejores condiciones, respecto a varios niveles de concentración específicos, de la composición hormonal de 2,4-D y quinetina, sobre la formación de callos friables. Así mismo, para el establecimiento de suspensiones celulares en medio basal MS, se determinaron las mejores concentraciones, para el crecimiento celular. Adicionalmente, se estudió el efecto elicitor que pudiera tener el metil jasmonato (MeJ) sobre la producción de los metabolitos en las suspensiones celulares de Nerium oleander, en concentraciones de 1, 10 y 100 ppm, aplicado en las distintas fases del crecimiento. Los mejores niveles hormonales encontrados para la formación de callos friables de Nerium oleander, para la auxina 2,4-D fue de 1.5 ppm, y para la citoquinina quinetina fue de 0.5 ppm, correspondiente a una relación auxina/citoquinina de 3. Iguales resultados se encontraron en el establecimiento de las suspensiones respecto al crecimiento celular. En la curva de crecimiento no se observó fase lag, mas sí se presentó una fase exponencial de 5 días y una fase estacionaria de 7 días. De acuerdo con la cinética de crecimiento, se obtuvo una tasa específica máxima de crecimiento celular, μm, de 0.608 días -1 y un tiempo de duplicación de la biomasa, td, de 1.14 días. No se detectó la formación de peruvósido y betulina en ninguna de las distintas fases del crecimiento. Finalmente, se encontró que el MeJ no elicita la producción de peruvósido y betulina en suspensiones celulares de Nerium oleander