Evaluación de la capacidad de diferenciación de células de sangre periférica hacia el linaje osteoclástico en diferentes tiempos de aplicación de fuerza tensil

Abstract

Células mononucleares de sangre periférica (CMNSP) fueron aisladas mediante un gradiente de Fycoll-Hypaque y estimuladas con 10 µg/ml de fitohemaglutinina (PHA) durante 72 h en medio de cultivo RPMI 1640 y suero fetal bovino al 10%, con el objetivo de evaluar la capacidad de actividad resortiva. Un grupo de células fue sometido a fuerzas de 5,28g/cm2 y otro grupo de células fueron fusionadas con Polietilenglicol (PEG), ambos evaluados en un periodo de 3, 5 y 7 días. Las células fueron sembradas sobre láminas de hueso cortical bovino estériles de aproximadamente 6 mm2 x 0.5 de profundidad tratadas o no con N-acetilcisteína (NAC). Para esto, se dividieron en 6 grupos de la siguiente manera: 1. Células no fusionadas, no tratadas con fuerza (-fu, -F) 2. Células no fusionadas, no tratadas con fuerza + NAC (-fu, -F+NAC). 3. Células no fusionadas + fuerza. (F) 4.Células no fusionadas, + fuerza+ NAC (F+NAC) 5. Células fusionadas con PEG (PEG) 6. Células fusionadas con PEG + NAC (PEG + NAC). Las células se fijaron con metanol ácido acético en proporción 1:3; a los 3, 5 y 7 días de cultivo, luego se procedió a evaluar la actividad de la enzima tartrato resistente (TRAP). Posteriormente se identificó la proteína de membrana utilizada como marcador de osteoclastos: Integrina ß3; por ultimo las células se retiraron de la lámina ósea y se evaluó la actividad resortiva sobre el hueso donde se cultivaron las células. Se encontró que al fusionar células con PEG, o aplicar una fuerza a células no fusionadas, se inducen marcadores característicos de células osteoclásticas y actividad resortiva, también de determino que NAC es un potente inhibidor de las actividades relacionadas con células resortivas.