Infección mixta en pacientes colombianos con criptococosis remitidos al instituto nacional de salud en el año 2014

Abstract

Estudios recientes informan que entre el 18,4 y el 57,1% de los casos de criptococosis son causados por infecciones mixtas, los pacientes pueden presentar infecciones en la que se involucran diferentes especies (Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii), serotipos (A, AD, D, B y C), genotipos (VNI, VNII, VNIII, VNIV, VGI, VGII, VGIII, VGIV) o pareja sexual (alfa o a). Teniendo en cuenta estos antecedentes, el objetivo de esta tesis fue determinar la posible presencia de infección mixta en pacientes con criptococosis remitidos durante el año 2014 al Instituto Nacional de Salud (INS) Se seleccionaron aislamientos clínicos de 60 pacientes remitidos durante el año 2014 al Grupo de Microbiología del INS, obtenidos, a partir de muestras tales como líquido cefalorraquídeo y hemocultivos. El aislamiento remitido al INS fue resembrado por agotamiento en agar glucosado de Sabouraud e incubado durante 72 horas a 37 °C. A partir de la resiembra, se seleccionaron 5 colonias por placa con base en las diferencias morfológicas de la colonia: tamaño, forma, bordes y textura cuando se presentaron, de lo contrario aleatoriamente, para un total de 300 colonias (5 colonias x 60 pacientes). A cada colonia aislada, se le realizaron pruebas bioquímicas convencionales (urea, CGB), se determinó el fenotipo de la colonia, tamaño capsular y celular, mediante pruebas moleculares se estableció la pareja sexual y el genotipo. Por medio de las pruebas fenotípicas, se determinó la misma especie en 57 aislamientos y en tres aislamientos el agar CGB fue considerado intermedio, lo que nos hizo sospechar de la presencia de un híbrido inter-especie, además se encontró que en un mismo aislamiento pueden estar presentes colonias con morfología macroscópica heterogénea. También se determinó que las colonias de un mismo aislamiento difieren en el tamaño capsular y celular. Mediante PCR huella digital, 58 aislamientos corresponden a Cryptococcus neoformans var grubii genotipo VNI y dos aislamientos a Cryptococcus gattii genotipo VGII. El tipo de pareja sexual de 43 aislamientos fue y 17 aislamientos presentaron los dos tipos de pareja sexual y a. Basados en los resultados fenotípicos y genotípicos se estableció que 18 pacientes presentaron infección mixta. Posteriormente se determinó la susceptibilidad in-vitro a anfotericina, fluconazol, voriconazol y 5-flucitosina mediante el método automatizado VITEK 2, en los aislamientos que correspondían a pacientes con infección mixta, demostrando que los 18 aislamientos son susceptibles a 5-flucitosina y voriconazol. Respecto a la susceptibilidad a anfotericina se determinó la presencia de un aislamientos (n=1) con la misma concentración inhibitoria mínima (CIM), 15 aislamientos difieren entre 1 a 3 diluciones en la CIM y 2 aislamientos presentaron colonias susceptibles y resistentes. Por otra parte, la susceptibilidad a fluconazol demostró una distribución similar a la de anfotericina, encontrando un aislamiento (n=1) con la misma CIM, 16 aislamientos con CIM que difieren en 1 a 3 diluciones y un aislamiento (n=1) con colonias susceptible, susceptible dosis dependiente y resistente. En este estudio, no se demostró una correlación estadísticamente significativa entre los pacientes con infección mixta y sin infección mixta. Sin embargo la presencia de infección mixta y de aislamientos con CIM diferente, evidencian la necesidad de estudiar más de una colonia por aislamiento en el curso de una infección.