Efecto de la suplementación con antioxidantes y el sistema de empaque sobre las características espermáticas del semen equino criopreservado y su relación con la criotolerancia espermática.

Abstract

Evaluar el efecto de la suplementación con antioxidantes y el sistema de empaque sobre las características espermáticas del semen equino criopreservado y la respuesta a la variabilidad individual a la criotolerancia. Materiales y métodos: se empleó semen de 10 caballos con fertilidad comprobada, que fue colectado de diferentes criaderos del departamento de Antioquia, posteriormente fue criopreservado empleando dos sistemas de empaque (pajilla 0.5 ml y pajilla 0.25 ml) y dos antioxidantes (Vitamina E y Quercetina), con niveles de concentración 20µM, 200 µM, 2000 µM para Vitamina E y 2.5 µM, 25 µM, 250 µM para Quercetina. Después de descongelar las pajillas, se realizó evaluación de los parámetros de calidad seminal: movilidad (, funcionalidad de membrana, reacción acrosomal, actividad de membrana mitocondrial, integridad de ADN y porcentaje de vitalidad. Para el análisis estadístico se hicieron análisis de varianza (ANOVA) con estructura factorial y prueba de Dunnett, adicionalmente se realizaron comparaciones múltiples de medias. Resultados: El antioxidante afectó significativamente (P0.05) los parámetros de movilidad VAP (µm/s), VSL (µm/s), VCL (µm/s), ALH (µm/s) y Linearidad (%). El % de actividad mitocondrial y % de vitalidad fueron afectadas por la interacción del antioxidante y sus niveles de concentración, El antioxidante Quercetina en la concentración 2.5 µM tuvo un efecto altamente significativo (P= 0.000306) sobre el % de actividad mitocondrial. Adicionalmente, se evidenció el efecto (P0.05) del tratamiento: tamaño de pajilla: 0.5 ml, antioxidante: Quercetina, concentración: 2.5 µM, respecto al control para las variables: Velocidad rectilínea (VSL), % Spm Progresivos, Amplitud lateral de la cabeza (ALH). Conclusion: la suplementación con antioxidantes y el sistema de empaque mejoran algunos parámetros espermáticos post-descongelación, sin embargo, no optimizan de manera contundente el protocolo de congelación del semen equino, y no es posible establecer su relación directa con la criotolerancia. El fenómeno de criotolerancia espermática parece estar determinado por la respuesta individual de los reproductores a los procesos de superenfriamiento y congelación.

Abstract: This study evaluated the effects of antioxidant supplementation and packaging system on stallion cryopreserved sperm characteristics and cryotolerance individual variability. Materials and Methods: Ten ejaculate samples from fertile horses in different farms from the Antioquia department (Colombia), were collected and assessed for semen traits. Each sample was cryopreserved using two packaging systems (straw 0.5 ml and straw 0.25 ml) and two different antioxidants (vitamin E and Quercetin) with concentration levels of 20 µM , 200 µM, 2000 µM for Vitamin E and 2.5 µM, 25 µM, 250 µM for Vitamin E. Post-thaw evaluation of semen quality parameters was performed: mobility were assessed through CASA software (Computer Assisted Sperm Analyzer), plasma membrane functionality were assessed according hypo-osmotic test HOS; acrosome reaction parameters, mitochondrial membrane activity, DNA integrity and vitality percentage were assessed by flow cytometry. For statistical analyzes and multiple means comparison, variance analysis (ANOVA) with factorial structure and Dunnett's test were performed. Results: The antioxidant effect was representative (P 0.05) for mobility parameters VAP (µm/s), VSL (µm/s), VCL (µm/s), ALH (µm/s) and Linearity (%). Percentage of mitochondrial activity and vitality percentage were sensitive to the interaction of the antioxidant and its concentration levels (P 0.05). Highly significant effect of antioxidant Quercetin (P = 0.000306) on mitochondrial activity percentage was observed, particularly at 2.5 µM concentration. Additionally, for this specific treatment: 0.5 ml straw size and antioxidant 6 Quercetin at 2.5 µM concentration, effect was observed when compared with its respective control for variables: Velocity average path (VAP), Speed Progressive Velocity straight line (VSL),% Mobile sperm,% Progressives sperm, Velocity curvilinear (VCL), lateral amplitude of head (ALH) (P 0.05). Conclusions: Even though antioxidant supplementation and packaging system, improve some post-thawing sperm parameters, they do not optimize conclusively stallion semen freezing protocol, and it is not possible to establish a direct relationship between them and cryotolerance. Supplementation with antioxidants and different packaging systems did not decisively improve the process of equine semen freezing. Sperm cryotolerance phenomenon seems to be determined by the stallion individual response to the supercooling and freezing processes