Producción de sueros hiperinmunes equinos contra veneno de serpiente coral utilizando mezclas equimoleculares de venenoanticuerpo

Abstract

El envenenamiento severo de humanos con veneno de serpiente es un grave problema de salud pública alrededor del mundo, siendo más frecuente en países tropicales con áreas selváticas y algunos países desarrollados. En Colombia según reportes del Instituto Nacional de Salud, para el año 2007 fueron reportados 2.737 casos de mordedura por serpiente. El accidente ofídico es causado por un amplio número de serpientes. El veneno normalmente cumple dos funciones, la primera inmovilizar la presa y la segunda ayudar al proceso de digestión, ya que contiene tanto toxinas como enzimas. El envenenamiento por serpiente es tratado con la utilización de sueros hiperinmunes preparados contra el veneno en equinos, ovejas y asnos; en algunos casos, su uso está restringido a ciertas zonas geográficas debido a que la composición química y enzimática del veneno varía de una región a otra y de la edad de la serpiente. La variación en la composición química del veneno de una especie de serpiente en particular ha sido ampliamente documentada y se encuentra asociada con el habitad de la serpiente. Las serpientes de la familia Elapidae contienen diferentes especies de coral siendo estas 1/3 del total de serpientes en este grupo. El tratamiento de envenenamiento con veneno de coral, es tratado generalmente con el empleo de sueros hiperinmunes específicos que permiten lenta recuperación del paciente y son requeridas grandes cantidades, incrementando el número de reacciones alérgicas, enfermedad del suero, falla renal, etc. En este punto, es indispensable mejorar la calidad y potencia de los sueros hiperinmunes para disminuir la aparición de reacciones adversas. En esta aproximación, se formuló establecer una metodología alternativa para inmunizar animales, incluyendo algunas modificaciones en la preparación del antígeno, dosis utilizada y composición del adyuvante, con el fin de incrementar la concentración de anticuerpo específico en suero y disminuir la concentración de proteína total en la preparación por dosis para una más rápida, segura y efectiva recuperación del paciente, con mínimos efectos secundarios. Nuestros resultados muestran claramente que: (i) incremento en la dosis no mejora significativamente la concentración de anticuerpos en suero de animales inmunizados, (ii) la frecuencia de inmunización y metodología para preparación del inoculo, son factores importantes para mejorar el título de anticuerpos, (iii) la selección del método de fraccionamiento y su aplicación son parámetros importantes en la calidad del anticuerpo (iv) bajo las condiciones experimentales, la potencia de los sueros hiperinmunes ensayados es aproximadamente 3 veces mayor a la observada para el suero antiofídico SAAC- 006, (v) en nuestro modelo, el método de ELISA fue comparado con el método in vivo utilizado corrientemente para cálculo de la DL50 con base en la neutralización de anticuerpos, mostrando ser una alternativa.

Abstract: Human snake severe envenoming is a serious health problem all over the world and has a wide distribution in tropical regions with great forest areas, but also in some developed countries. In our country, was reported a total number of snakebite of 2737 in 2007 by the National Institute of Health. Envenoming may caused by not negligible number of different snake types. The function of snake venom is mainly help snake to immobilize and digest the victim, due to compounds present in the venom how enzymes and polypeptide toxins. Snake envenoming treatment is done using antivenom prepared from animals like horses, donkeys or sheep hyper-inmunized against the snake venom and in some cases its use is restricted to particular geographical area given that specific toxic and enzymatic activities could differ with the geographic origin and age of specimens. Variability in venom proteins and enzymes between specimens have been widely documented and it is associated with ecological niche were they live. Elapidae family snakes comprise coral species in about ane- third. Treatment coral envenoming with specific antivenom sera lead a slow victim recovery and larger antivenom volumes are needed, causing severe allergic reactions, serum sickness increasing risk for patients. At this point, is essential to improve antivenom quality and potency to diminish the adverse reactions. In this approach, we propose the establishment of alternative methodology to immunize animals including some modification in antigen preparation, dose injected and adyuvant to increase specific antibody concentration in serum and diminish total protein concentration in antivenom preparation for rapid and more effective recovery of the victim with minimal side effects. Our result show clearly that: (i) increase venom dose do not improve significantly specific antibody concentration in serum of immunized animals, (ii) frecuency and antigen preparation procedure are the most important parameters to improve specific antibody concentration, (iii) choice of sera fractionating method and its application are decisive parameters in antibody high quality, (iv) under our laboratory experimental conditions, antivenom potency of the sera tested was about 3 times higher than this display for reference antivenom SAAC- 006 (v) In our model, ELISA method was compared with in vivo method currently used to establish the DL50 by specific antibody neutralization, showing be a good alternative.