Contribución al estudio fitoquímico y a la evaluación de la actividad antiinflamatoria de las hojas de badea (Passiflora quadrangularis) y gulupa (Passiflora edulis var. edulis)

Abstract

El objetivo de este trabajo fue aislar e identificar los compuestos mayoritarios de los extractos acuosos de las especies P. edulis var. edulis Sims. (gulupa) y P. quadrangularis Linn. (badea), y evaluar la actividad antiinflamatoria de los extractos, fracciones y compuestos obtenidos en cantidad suficiente. Para el aislamiento de los compuestos mayoritarios se empleó cromatografía en columna clásica en fase reversa, y cromatografía en contracorriente en fase normal. El seguimiento de la separación se hizo por cromatografía en capa delgada, y HPLC-DAD-ELSD. Para la elucidación estructural se empleó RMN monodimensional y bidimensional, y ESI-TOF-MS/MS. Para el caso de la gulupa (Passiflora edulis var. edulis) se identificaron tres saponinas mayoritarias conocidas como ciclopassiflósidos IX (1), XI (2) y III (3), y se sugiere la presencia de tres flavonoides minoritarios en el extracto acuoso, las cuales ya habían sido reportadas para una forma de P. edulis sin identificar. Este es el primer trabajo que describe la composición química de la fracción polar de hojas de gulupa. De igual manera, para el caso de la badea (Passiflora quadrangularis) se identificaron 4 saponinas tipo cicloartano no reportadas previamente, que se identificaron como los quadrangulósidos B (4) y C (9), 1β-hidroxi-quadrangulósidos A (5) y C (12); además de 2 saponinas tipo cicloartano previamente aisladas identificadas como el 1β-hidroxi-quadrangulósido D (10) y el 1α-hidroxi-quadrangulósido B (11). Adicionalmente, se identificaron 2 saponinas en mezcla como la 1α-hidroxi-quadrangulósido A (6) y 1β-hidroxi-quadrangulósido B (7) las cuales tampoco habían sido reportadas en la literatura. Finalmente, se identificó una saponina derivada del ácido oleanólico ya reportada (8) y el flavonoide C-glicosidado con núcleo apigenina 2’’-xilosil-vitexina (13) ya reportado para esta especie y otras especies del género Passiflora. La actividad antiinflamatoria se determinó mediante un ensayo in vivo, usando un modelo de inflamación de oreja de ratón inducida por la administración de dosis múltiple de TPA. Se encontró que la saponina mayoritaria 4, y la fracción de flavonoides de P. quadrangularis, presentan actividad antiinflamatoria. De igual manera, a los exudados obtenidos del ensayo previamente descrito se les evaluó la actividad de mieloperoxidasa y la expresión del mediador óxido nítrico. Encontrando actividad de inhibición de mieloperoxidasa por parte de la saponina 1, y una menor actividad de las saponinas 2 y 4. Se observó una actividad inhibitoria de la liberación de mieloperoxidasa de las fracciones de flavonoides, de ambas especies, mayor que la actividad exhibida por las fracciones de saponinas. En cuanto al ensayo de expresión de óxido nítrico, se observó una mayor actividad para las saponinas 1 y 2, que para los otros compuestos puros evaluados, y se resalta la alta actividad de las fracciones de saponinas y flavonoides de P. edulis var. edulis mayor que las fracciones respectivas de P. quadrangularis. Estos resultados concuerdan con reportes previos de actividad antiinflamatoria evaluada en otros modelos para especies del género Passiflora. Estos resultados indican un alto potencial para los extractos acuosos y fracciones butanólicas de las hojas de gulupa y badea como antiinflamatorios.

Abstract Passiflora quadrangularis and Passiflora edulis var. edulis, known as badea and gulupa, respectively, are cultivated at Colombian low lands. Their edible fruits are used for local consumption in juices. On the other hand, species of Passiflora genus are well known by their anxiolytic and anti-inflammatory extracts. In this sense, the aim of this work was to isolate and identify the major compounds from aqueous extracts of P. quadrangularis Linn. and P. edulis var. edulis Sims. leaves. Also to evaluate the anti-inflammatory activity of the extract, fractions and pure compounds. The isolation of the main compounds was conducted by high-speed countercurrent chromatography (HSCCC), column chromatography and HPLC-DAD-ELSD. The structure analysis was made by spectroscopic methodologies as monodimensional and bidimensional NMR and ESI-TOFMS/MS. Gulupa (Passiflora edulis var. edulis) yielded three previously reported saponins, known as cyclopassiflosides IX (1), XI (2) y III (3), and were suggested three minoritary flavonoids from aqueous extract, previously reported for an unidentified variety of P. edulis. This is the first research that describe chemical composition of the polar fraction of gulupa leaves. For badea (P. quadrangularis) was possible to isolate four novel cycloartane type saponins identified as quadranguloside B (4), 1β-hydroxi-quadrangulosides A (5), C (9) and D (12), two cycloartane type saponins previously isolated and identified as 1β-hydroxiquadranguloside E (10) and 1α-hydroxi-quadranguloside B (11). Also, two novel saponins were identified in mixture as 1α-hydroxi-quadranguloside A (6) and 1β-hydroxiquadranguloside B (7). Finally, the known compounds oleanolic acid derivated saponin (8) and the flavonoid 2’’-xylosil-vitexin (13) were identified as has been done for another Passiflora species. Anti-inflammatory activity was evaluated using TPA-induced ear edema model. Saponin 4 and flavonoids fraction of P. quadrangularis showed an anti-inflammatory activity similar to these showed by dexamethasone, positive control used in this assay. Myeloperoxidase activity and nitric oxide mediator production in the ear exudates were evaluated, the results showed that inhibition on liberation of myeloperoxidase activity by saponin 1 and lower activity for saponins 2 and 4. Flavonoids fraction for both species showed greater inhibition of myeloperoxidase activity than these caused by saponins fractions. Saponins 1 and 2 showed activity in the production of nitric oxide. Saponins and flavonoids fractions from P. edulis var. edulis showed greater inhibition activity in the production of nitric oxide than these caused by P. quadrangularis fractions. These results are in agreement to those reported for other Passiflora species extracts using different models. These results indicate great potential for aqueous polar extract and butanolic fractions of gulupa and badea leaves as anti-inflammatory.