Detección de Streptococcus agalactiae por PCR en tejidos de Tilapias rojas (Oreochromis spp.) menores de 20g

Abstract

La estreptococosis es uno de los problemas sanitarios más importantes en la acuicultura mundial. En Colombia, dentro de las especies de estreptococos, solo se ha confirmado la presencia del S. agalactiae en animales mayores de 20g, causando importantes pérdidas en las explotaciones de tilapia (Oreochromis spp). Su diagnóstico se basa en los signos clínicos, las lesiones histopatológicas y el aislamiento microbiológico; sin embargo, se requiere de técnicas más sensibles que confirmen o descarten la presencia de la bacteria en animales de tallas menores. La técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) anidada permite identificar con una alta sensibilidad y especificidad un gen de interés de un microorganismo que posiblemente se encuentre en bajas concentraciones en una muestra. El objetivo de esta investigación fue evaluar mediante la amplificación anidada de la región intergenica 16S-23S ARNr (Berridge et al en el 2001) la presencia o ausencia de S. agalactiae en tejidos congelados y embebidos en parafina de tilapias menores de 20g (Oreochromis spp.) así como en ovas, ovas fecundadas y semen, provenientes de granjas positivas a la infección. El 99,75% de las muestras (403) provenientes de larvas y alevinos resultaron negativas, al igual que el 100% de las muestreas (88) de semen, ovas y ovas fecundadas. La PCR estandarizada no evidencio reacción cruzada con otros miroorganismos Gram positivos (S. iniae, Enterococcus faecalis, S. pneumoniae, L. garviae) y mostró un límite de detección de 6,95 fg en el caso de tejidos congelados y de 6,95 pg para tejidos embebidos en parafina. / Abstract. The streptococcosis is one of the most important health problems in world aquaculture. In Colombia, within the streptococcal species, has only confirmed the presence of S. agalactiae in animals older than 20g, causing significant losses on their holdings of tilapia (Oreochormis spp.). Diagnosis is based on clinical signs, histopathological lesions and the microbiological isolation, but requires more sensitive techniques to confirm or rule out the presence of bacteria in animals of smaller size. The technique of Chain Reaction (PCR) nested to identify with high sensitivity and specificity of a gene of interest by a microorganism that may be present in low concentrations in a sample. The objective of this research was to evaluated by nested amplification of the intergenic region 16S-23S (Berridge et al., 2001) the presence or absence of S. agalactiae in frozen tissue and paraffin embedded under 20g tilapia (Oreochromis spp.), as well as eggs, fertilized eggs and semen from farms positive for infection. The 99.75% of the samples (403) from larvae and fry were negative, as 100% of the samples (88) of semen, ova and fertilized eggs. The PCR method did not evidence microorganisms cross-react with other Gram positive (S. iniae, Enterococcus faecalis, S. pneumoniae, L. garviae) and showed a detection limit of 6.95 fg in the case of frozen tissue and 6.95 pg for paraffin embedded tissue.