Búsqueda de fosfoproteínas expresadas diferencialmente en dos líneas celulares invasivas de trofoblasto y su relación con la malignización del trofoblasto / Proteomic analysis of phosphoproteins differentially expressed in two invasive-trophoblast cell line and its relation with trophoblast malignization

Abstract

El trofoblasto se desarrolla durante el primer trimestre de embarazo y es caracterizado por una alta tasa de proliferación e invasión, compartiendo diversas vías de señalización y habilidades celulares con tumores malignos. El objetivo de este trabajo fue encontrar proteínas expresadas y fosforiladas diferencialmente en respuesta a cambios en el microambiente, que correlacionarán con la regulación existente en el trofoblasto y la progresión maligna que exhiben la línea celular de trofoblasto pre-maligno HTR8/SVneo y la línea celular de coriocarcinoma JEG-3. Las células HTR8/SVneo y las células JEG-3 fueron estimuladas con o sin suero fetal bovino (SFB 10%) para obtener el sub-proteoma de citoplasma basal, los fosfoproteomas y proteomas totales control y estimulado. Todos los proteomas fueron separados mediante electroforesis bidimensional y comparados entre ellos. Para la línea HTR8/SVneo se observaron 49 “spots” de fosfoproteína diferencialmente fosforilados/activados en respuesta al SFB, de los cuales 29 correspondían a proteínas de citoplasma. En el proteoma total, de 281 “spots” analizados encontramos 236 “spots” expresados diferencialmente de forma significativa. Las proteínas diferencialmente expresadas y las fosfoproteínas diferencialmente activadas se identificaron por espectrometría de masas, encontrando proteínas vinculadas con estrategias implementadas por células malignas, en respuesta al medio libre de suero. Al comparar la línea HTR8/SVneo con la línea JEG-3 se encontró un mayor número de “spots” de proteína de citoplasma expresada y un mayor nivel fosforilación en los proteomas de la línea de coriocarcinoma, las cuales pueden estar vinculadas en la transducción de la señal intracelular asociada con el mantenimiento del fenotipo maligno. / Abstract. Trophoblast develops during the first trimester of pregnancy and is characterized by a high rate of proliferation and invasion, sharing many signaling pathways and cell skills with malignant tumors in a highly regulated physiologic context. The aim of this work was to find differentially expressed and phosphorilated proteins in response to micro-environment changes, which correlate with existing regulation in trophoblast and malignant progression that exhibit the HTR8/SVneo pre-malignant trophoblast cell line and JEG-3 choriocarcinoma cell line. HTR8/SVneo cells and JEG-3 cells were stimulated with or without foetal bovine serum (FBS, 10%) to obtain the basal cytoplasmic sub-proteome and the control and stimulated phosphoproteomes and total proteomes. All proteomes were separated by two-dimensional electrophoresis and compared between them. In HTR8/SVneo cell line was observed that 49 phosphoprotein spots were differentially phosphorilated/activated by FBS, out of which 29 corresponded to cytoplasmic proteins. In total proteome, of 281 analyzed spots we found 236 spots significantly differentially expressed. The differentially expressed proteins and differentially activated phosphoproteins were identified by mass spectrometry, finding proteins linked with strategies implemented by malignant cells in response to free-serum medium, which is a stressed micro-environment. When we compared the HTR8/SVneo line with the JEG-3 line, was found a higher number of cytoplasm protein spots and a higher phosphorylation level in the choriocarcinoma proteomes, which can be linked to intracellular signal transduction associated with malignant phenotype maintenance.