Estudio del transporte de nucleótidos en parásitos intracelulares: caracterización de un posible transportador de NAD+ en Leishmania braziliensis

Abstract

Leishmania braziliensis es un parásito protozoario intracelular, agente causal de la Leishmaniasis, una enfermedad de alta incidencia cuyo tratamiento ocasiona graves efectos secundarios en el hospedero. En L. braziliensis se ha identificado únicamente una NMNAT (enzima central en la biosíntesis del NAD) al igual que en otros parásitos intracelulares como Trypanosoma cruzi y Plasmodium falciparum, en comparación con varias isoenzimas reportadas para organismos extracelulares como Giardia intestinalis (GiNMNAT1-2) y Saccharomyces cerevisiae (ScNMNAT1-3), así como en eucariotas superiores donde se presentan múltiples formas. Esto indica una posible simplificación evolutiva de las rutas de biosíntesis frente a las de transporte en estos organismos, lo que se ha demostrado en parásitos intracelulares procariotas como la bacteria Protochlamydia amoebophila que posee 5 proteínas (PamNTT1-5) con capacidad de transportar diversos nucleótidos incluido el NAD+ y Chlamydia trachomatis para la cual se han identificado 2 transportadores (CtNpt1-2). Esto sugiere, que en parásitos intracelulares eucariotas posiblemente existen procesos de transporte de nucleótidos. De acuerdo con lo anterior, se propuso el estudio de un candidato a transportador de NAD+ en Leishmania braziliensis (LbTNTA) mediante la obtención de una herramienta inmunológica desarrollada en el modelo aviar (IgY’s), con la cual se detectó a LbTNTA en amastigotes axénicos y promastigotes del parásito con localización sub-celular diferencial para cada estadio, presentando una co-localización parcial en mitocondria en amastigotes axénicos. Adicionalmente, se comprobó que LbTNTA se encuentra modificado por N-glicosilaciones en ambos estadios. Por último, se desarrollaron dos herramientas para evaluar al candidato funcionalmente empleando la complementación en Saccharomyces cerevisiae y mediante la expresión de la proteína recombinante MISTIC-LbTNTA insertada en membranas de E. coli. Los resultados obtenidos mediante ensayos de complementación permitieron identificar la existencia del primer transportador de NAD identificado en parásitos protozoarios, el TNTA de L. braziliensis (LbTNTA).