Expresión del receptor TRPV1 en celulas similares a odontoblastos humanos: una alternativa terapéutica para el dolor y la sensibilidad dentinal

Abstract

Dentin hypersensitivity and dental pain are a frequent reason for consultation in dentistry; however, its pathophysiology has not yet been fully clarified. Previous findings have made it possible to relate the cellular sensory capacity with the activation of the polymodal receptor TRPV1, responsible for the nociceptive response and whose desensitization could cause analgesia. For this reason, the objective of this was to determine the expression, localization and functional activity of TRPV1 in human odontoblast-like cells (hOLCs). The human dental pulp stem cells (hDPSCs) were obtained and characterized and subjected to odontogenic differentiation for 7, 14 and 21 days; and its phenotype was evaluated by immunofluorescence for the odontogenic markers dentinal matrix protein 1 (DMP-1) and dentin sialoprotein (DSP). TRPV1 gene expression was estimated by RT-qPCR and its location was established by immunofluorescence. The EC50 of Eugenol (EUG) and Capsaicin (CAP) was determined and the activation of the receptor was evaluated under chemical, thermal and under changes in pH stimulation. For the statistical analysis, a oneway ANOVA was used with a Tukey post hoc test (p <0.05). After establishing the expression and membrane localization of TRPV1 in hOLCs, its chemical activation with EUG and CAP, its thermal at ≥ 43 °C and its activation with acidic pH <6 or basic ―between 9 and 12― were demonstrated. Receptor desensitization was achieved after 20 min exposure to concentrations of 603.5 and 1000 µM of EUG. These findings represent a contribution to the construction of a pulp pain study model aimed at offering therapeutic alternatives for these pathologies.

La hipersensibilidad dentinal y el dolor dental son motivo de consulta frecuente en odontología; sin embargo, aún no se ha esclarecido totalmente su fisiopatología. Hallazgos previos han permitido relacionar la capacidad sensitiva celular con la activación del receptor polimodal TRPV1, responsable de la respuesta nociceptiva y cuya desensibilización podría provocar analgesia. Por esta razón, el objetivo de este estudio fue determinar la expresión, localización y actividad funcional de TRPV1 en células similares a odontoblastos humanos (hOLCs). Se obtuvieron células madre mesenquimales (hDPSCs) que fueron caracterizadas y sometidas a diferenciación odontogénica por 7, 14 y 21 días; y se evaluó su fenotipo mediante inmunofluorescencia para los marcadores odontogénicos proteína de matriz dentinal 1 (DMP-1) y sialoproteína dentinal (DSP). Se estimó la expresión génica de TRPV1 mediante RT-qPCR y la localización del mismo se estableció mediante inmunofluorescencia. Se determinó la CE50 de Eugenol (EUG) y Capsaicina (CAP) y se evaluó la activación del receptor ante estimulación química, térmica y bajo exposición a distintos pH. Para el análisis estadístico se utilizó un ANOVA de una vía con una prueba post hoc de Tukey (p<0.05). Tras establecer en hOLCs la expresión y localización membranal de TRPV1, se demostró su activación química con EUG y CAP, su activación térmica a ≥ 43 °C, y su activación con pH ácidos <6 o básicos ―entre 9 y 12―. La desensibilización del receptor se logró tras una exposición de 20 min a concentraciones de 603,5 y 1000 μM de EUG. Estos hallazgos representan un aporte para la construcción de un modelo de estudio del dolor pulpar orientado a ofrecer alternativas terapéuticas para estas patologías.