“Estudio piloto para la determinación de la expresión de ID1, ID3 e IGJ en Leucemia Linfoblástica Aguda B a partir de muestras de médula ósea”

Abstract

La Leucemia Linfoblástica Aguda B (LLA-B), es una malignidad que se desarrolla en la médula ósea, comprometiendo los precursores hematopoyéticos de linaje B. La población adulta en Colombia presenta una tasa inferior de sobrevida con relación a la que se reporta en otros países. En este trabajo exploratorio descriptivo se observa el comportamiento de la expresión de los genes ID1, ID3 e IGJ, en líneas celulares, tejido de MO (médula ósea) fresco y Fijado en formalina embebido en parafina (FFPE). Metodología Se realizó aislamiento de ARN, conversión a ADNc, seguidamente, se observó asociaciones en amplificación y expresión de ID1, ID3 e IGJ en líneas celulares AGS, MCF7, REH y THP-1 y tejidos de pacientes diagnosticados con LLA-B frescos y en FFPE a través de qPCR (PCR cuantitativa en tiempo real) y análisis por el método de 2- ΔΔCq. Para mejorar el rendimiento en la amplificación de los genes de interés en biopsia de M.O en tejido FFPE, se probaron variables de laboratorio y la preamplificación de ADNc. Resultados Se caracterizaron las líneas celulares REH, AGS, MCF7 y THP-1, seguidamente se observó sus patrones de expresión para los genes objetivo. En el tejido FFPE se apreció una mejora con el empleo de la preamplificación. Finalmente, se comparó la expresión en cinco aspirados de M.O en pacientes con LLA-B, donde la expresión para ID1 e ID3 fue diferencial. Conclusión La observación comparativa de genes entre tejidos permite la realización de asociaciones acerca de la amplificación en diferentes tejidos y pacientes. Realizar modificaciones a los protocolos de extracción y la aplicación de preAmp puede permitir el mejoramiento de la detección de expresión de genes en tejido de M.O en FFPE, haciendo parte de las alternativas para aprovechar estos tejidos de valor que se tienen almacenados.

Acute Lymphoblastic Leukemia B (B-ALL) is a malignancy that develops in the bone marrow, compromising the hematopoietic precursors of lineage B. The adult population in Colombia has a lower survival rate compared to that reported in other countries. In this descriptive exploratory work, the expression behavior of the ID1, D3 and IGJ genes is observed in cell lines, fresh BM (bone Marrow) tissue and Formalin-fixed, paraffinembedded (FFPE). Methodology: RNA Isolation and conversión to cDNA were performed, then associations in amplification and expression of ID1, ID3 and IGJ were observed in AGS and MCF7, REH and THP-1 cell lines and tissues of patients diagnosed with fresh B- ALL and in FFPE throug qPCR (quantitative real-time PCR) and analysis by the 2 - ΔΔCq method. To improve performance in the the amplification of the genes of interest in biopsy of BM in FFPE tissue, laboratory variables and preamplification of cDNA were tested. Results: The REH, AGS, MCF7 and THP-1 cell lines were caracterizad, followed by their expression patterns for the target genes. Improvement in the FFPE fabric was seen with the use of preamplification. Finally the expression in fuve aspirates of BM in patients with B-ALL was compared, where the expression for ID1 and ID3 was differential. Conclusion: The comparative observation of genes between tissues allowas the realization of association in different tissues and patients. Making modifications to the extraction protocols and the application of preAmp can allow the improvement of the detection of gene expression in BM tissue in FFPE, making part of the alternatives to take advantage of theses valuable tissues that are stored.