Expresión de la Cinasa ROCK 2 y de los microRNAs-138-5p y 455-3p en células de melanoma B16 expuestas a 5-Bromo-2´-deoxiuridina y su asociación con proliferación, adhesión, migración y viabilidad celular

Abstract

ROCK 2 participa en la reestructuración del citoesqueleto, adhesión y contractilidad celular; aunque se conoce su asociación con la proliferación, migración e invasión en diferentes modelos celulares, poco se sabe sobre las bases moleculares de su regulación en células de melanoma. El objetivo de este trabajo fue evaluar los cambios en la morfología, proliferación y las variaciones de expresión de ROCK 2, miR-138-5p y miR-455-3p, dianas moleculares de ROCK 2, en células B16F1 expuestas al análogo de timidina, 5- Bromo-2'- deoxiuridina (BrdU). La exposición a BrdU (72 h) indujo una disminución del 65% en la proliferación, y un fenotipo senescente con aumento de 2,2 veces en el área celular aparente, aumento de 1,27 veces en el diámetro y la granulación. Las células expuestas mejoraron su capacidad de adhesión, circularidad y cierre de heridas y disminuyeron su migración en la cámara de Boyden en un 86,6%. La expresión de la proteína ROCK 2 mostró una disminución de aproximada de 3 veces en su mRNA, y después de la adición de un inhibidor de su actividad (Y27632), se observaron variaciones en la movilidad, polimerización de F-actina y VIM. Estos resultados coincidieron con una disminución de la expresión de miR-138-5p (1,8 veces) y un aumento de miR-455-3p (2,39 veces). En general, es posible sugerir que ROCK 2 participa en la regulación de los cambios morfológicos observados después de la exposición a BrdU, y su acción podría estar regulada, al menos en parte, por la expresión de miR-138-5p y miR-455-3p. (texto tomado de la fuente)

ROCK 2 is involved in cytoskeleton restructuring, cell adhesion and contractility; although its association with proliferation, migration and invasion is known in different cell models, little is known about the molecular basis of its regulation in melanoma cells. The aim of this work was to evaluate changes in morphology, proliferation and expression variations of ROCK 2, miR-138-5p and miR-455-3p, molecular targets of ROCK 2, in B16F1 cells exposed to the thymidine analog, 5- Bromo-2'- deoxyuridine (BrdU). Exposure to BrdU (72 h) induced a 65% decrease in proliferation, and a senescent phenotype with 2.2-fold increase in apparent cell area, 1.27-fold increase in diameter and granulation. Exposed cells improved their adhesion, circularity and wound closure capacity and decreased their migration in the Boyden chamber by 86.6%. ROCK 2 protein expression showed an approximately 3-fold decrease in its mRNA, and after addition of an inhibitor of its activity (Y27632), variations in motility, F-actin polymerization and VIM were observed. These results coincided with a decrease in miR-138-5p expression (1.8-fold) and an increase in miR-455-3p (2.39-fold). Overall, it is possible to suggest that ROCK 2 participates in the regulation of the morphological changes observed after BrdU exposure, and its action could be regulated, at least in part, by the expression of miR-138-5p and miR-455 -3p.