Evaluación de la viabilidad espermática de semen porcino refrigerado en diluyentes de larga y extra-larga duración mediante métodos diagnósticos no convencionales
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Resumen
El objetivo de este estudio fue evaluar la calidad funcional del semen porcino refrigerado almacenado en diluyentes de larga duración (LDA y LDB) y de extra-larga duración (ELD) mediante técnicas objetivas de evaluación espermática, incluyendo el análisis seminal asistido por computadora (Computer-Assisted Sperm Analysis, C.A.S.A) y la citometría de flujo. Se recolectó semen de seis cerdos sanos en cuatro ocasiones, obteniéndose un total de 24 repeticiones. Cada eyaculado se dividió en tres alícuotas y se diluyó con los diluyentes ELD, LDA o LDB. Las muestras se almacenaron a 16 °C y se evaluaron en los días 1, 4, 7 y 10 posteriores a la colecta (día 0 = día de la colecta). Los análisis estadísticos se realizaron mediante un análisis de varianza de una vía (ANOVA), previa verificación del supuesto de normalidad, considerando diferencias significativas cuando P < 0,05.
Los parámetros cinéticos espermáticos fueron evaluados mediante el sistema C.A.S.A, mientras que la integridad de la membrana plasmática y acrosomal (PI/Alexa Fluor 488) y el potencial de membrana mitocondrial (JC-1) fueron determinados mediante citometría de flujo. El diluyente ELD presentó la mayor capacidad de preservación durante el período de almacenamiento, manteniendo valores superiores de calidad espermática a lo largo de la evaluación. La motilidad total en el diluyente ELD disminuyó de 94,7 % en el día 1 a 72,5 % en el día 10, mientras que la integridad de la membrana plasmática y acrosomal se redujo de 85,1 % a 72,5 % y el potencial de membrana mitocondrial de 88,6 % a 70,0 %, respectivamente. El diluyente LDA mostró un comportamiento similar al observado con ELD, mientras que el diluyente LDB presentó el mayor deterioro de la calidad espermática, con reducciones en la motilidad total (94,0 % a 63,5 %), la integridad de la membrana plasmática y acrosomal (84,6 % a 63,6 %) y el potencial de membrana mitocondrial (89,0 % a 62,7 %). Las diferencias significativas (P < 0,05) entre los diluyentes se observaron principalmente durante los períodos prolongados de almacenamiento, especialmente en los días 7 y 10.
En conclusión, los diluyentes ELD y LDA proporcionaron una mejor preservación de la calidad funcional de los espermatozoides en comparación con el diluyente LDB durante el almacenamiento refrigerado a 16 °C por un período de hasta 10 días. Estos resultados respaldan el uso de diluyentes de larga y extra-larga duración como herramientas eficaces para optimizar la conservación del semen y mejorar el manejo de los programas de inseminación artificial en sistemas intensivos de producción porcina. (Texto tomado de la fuente)
Abstract
The objective of this study was to evaluate the functional quality of refrigerated boar semen stored in long-term (LDA and LDB) and extra long-term (ELD) extenders using objective sperm assessment techniques, including computer-assisted sperm analysis (C.A.S.A) and flow cytometry. Semen was collected from six healthy boars on four occasions, resulting in 24 replicates. Each ejaculate was divided into three aliquots and diluted with ELD, LDA, or LDB extenders. Samples were stored at 16°C and evaluated on Days 1, 4, 7, and 10 after collection (Day 0 = collection day). Statistical analyses were performed using one-way ANOVA after verification of normality, with significance established at P < 0.05.
Sperm kinetic parameters were evaluated by C.A.S.A, while plasma and acrosomal membrane integrity (PI/Alexa Fluor 488) and mitochondrial membrane potential (JC-1) were assessed by flow cytometry. The ELD extender showed the highest preservation capacity during storage, maintaining higher sperm quality parameters throughout the evaluation period. Total motility in ELD decreased from 94.7% on Day 1 to 72.5% on Day 10, while plasma and acrosomal membrane integrity decreased from 85.1% to 72.5% and mitochondrial membrane potential from 88.6% to 70.0%, respectively. The LDA extender showed a similar performance to ELD, whereas LDB exhibited the greatest deterioration, with reductions in total motility (94.0% to 63.5%), plasma and acrosomal membrane integrity (84.6% to 63.6%), and mitochondrial membrane potential (89.0% to 62.7%). Significant differences (P < 0.05) between extenders were mainly observed after prolonged storage, particularly on Days 7 and 10.
In conclusion, ELD and LDA extenders provided better preservation of sperm functional quality than LDB during refrigerated storage at 16°C for up to 10 days. These findings support the use of long-term and extra long-term extenders as valuable tools for improving semen preservation and artificial insemination management in intensive swine production systems.
Descripción
ilustraciones, diagramas, tablas