Estudio de la estructura fina, la ultraestructura y la inmunorreactividad a MAP2 en el cerebelo de ratones inoculados con el virus de la rabia
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Resumen
Introducción: Se requiere estudiar los mecanismos patogénicos de la rabia en el sistema nervioso como fundamento para desarrollar métodos terapéuticos. Objetivo: Estudiar el efecto de la infección con virus de la rabia (RABV) en la estructura fina, la ultraestructura, y la expresión tisular de la proteína MAP2 en el cerebelo de ratones. Metodología: Ratones ICR de 4-6 semanas se inocularon, por vía intramuscular, con RABV de la cepa CVS. Seis días después los animales manifestaron signos avanzados de la enfermedad. Bajo anestesia profunda los ratones se fijaron por perfusión intracardiaca con paraformaldehído al 4% y/o glutaraldehído al 1-2%. Se extrajeron los cerebelos, se obtuvieron cortes sagitales en un vibrátomo y se procesaron mediante las diferentes técnicas utilizadas: a) inmunohistoquímica con anticuerpos anti-rabia y anti-MAP2, b) inclusión y corte del tejido en resinas epóxicas para su observación en microscopía óptica de alta resolución (MOAR) y en microscopia electrónica. Resultados: La inmunorreactividad al RABV fue notoria en los núcleos profundos y en la corteza del cerebelo, no así en la sustancia blanca. Hubo marcación en la mayoría de las células de Purkinje, incluyendo su árbol dendrítico, así como en las células granulares y en diferentes tipos de interneuronas. La inmunotinción de MAP2 en los controles fue más evidente en la capa granular y en las dendritas de las células de Purkinje, pero los somas de estas últimas neuronas no fueron inmunorreactivos a MAP2 y la marcación fue escasa en las interneuronas. En los infectados se incrementó notablemente la inmunorreactividad a MAP2 en todas las capas de la corteza del cerebelo y en los núcleos profundos. Fue tan significativo que la proteína se hizo visible con intensidad en los somas de las células de Purkinje y las interneuronas. En los cortes semifinos y en microscopía electrónica se pudo observar degradación parcial del citoplasma y las dendritas proximales en algunas células de Purkinje en los infectados. El hallazgo más importante en microscopía electrónica fue la presencia de dendritas mielinizadas con mayor frecuencia en la corteza del cerebelo de los animales infectados con rabia. Conclusiones: El RABV inoculado por vía periférica puede infectar a los principales tipos de neuronas en el cerebelo. En el cerebelo la patología dendrítica parece estar está asociada con el aumento de la expresión tisular de la proteína MAP2 tal como se había comprobado antes en otras estructuras del sistema nervioso del ratón. Los cambios ultraestructurales en el cerebelo exhibieron diferencias y similitudes con los descritos previamente en la corteza cerebral de los ratones infectados con rabia. (Texto tomado de la fuente).
Abstract
Introduction: The pathogenetic mechanisms of rabies in the nervous system need to be studied as a basis for developing therapeutic methods. Objective: To study the effect of rabies virus (RABV) infection on the fine structure, ultrastructure, and tissue expression of the MAP2 protein in cerebellum of mice. Methodology: Four-week-old ICR mice were inoculated intramuscularly with RABV of the CVS strain. Six days later, the animals showed advanced signs of disease. Under deep anesthesia, the mice were fixed by intracardiac perfusion with 4% paraformaldehyde and/or 1-2% glutaraldehyde. The cerebellums were removed, sagittal sections were obtained on a vibratome and processed using the following techniques: a) immunohistochemistry with anti-rabies and anti-MAP2 antibodies, b) embedding and sectioning the tissue in epoxy resins for observation by high-resolution optical microscopy and electron microscopy. Results: RABV immunoreactivity was notable in the deep nuclei and cerebellar cortex, but not in the white matter. Labeling was present in most Purkinje cells, including their dendritic tree, as well as in granule cells and different types of interneurons. MAP2 immunostaining in controls was more evident in the granular layer and in dendrites of Purkinje cells, but the somas of Purkinje neurons were not immunoreactive for MAP2 and labeling was scarce in interneurons. In infected individuals, MAP2 immunoreactivity was markedly increased in all layers of the cerebellar cortex and deep nuclei. This increase was so significant that MAP2 protein was
intensely visible in the somas of Purkinje cells and interneurons. In semithin sections and electron microscopy, partial degradation of the cytoplasm and proximal dendrites was observed in some Purkinje cells in infected individuals. The most important finding in electron microscopy was the presence myelinated dendrites in the cerebellar cortex of rabies- infected animals. Conclusions: Peripherally inoculated RABV can infect all types of neurons in the cerebellum. In cerebellum, dendritic pathology appears to be associated with increased tissue expression of MAP2 protein, as has been previously demonstrated in other structures of the mouse nervous system. Ultrastructural changes in the cerebellum exhibited differences and similarities with those previously described in the cerebral cortex of rabies- infected mice.
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